蔡司掃描電子顯微鏡生物樣品成像方式及制備流程
蔡司掃描電子顯微鏡以其卓越的分辨率,為我們揭示了光鏡下無法捕捉的生物樣品細節。但為了更好地利用這一強大工具,理解不同的生物電鏡成像方式及其相應的樣品制備流程至關重要。本文為您梳理了幾種常見的生物電鏡成像方式,和對應的基本制樣流程。
對樣品表面形貌進行觀察時
01 臨界點干燥法
適用范圍
適合大部分生物樣品的表面成像。
基本制備流程
取材-清洗-固定-脫水-臨界點干燥-粘樣噴金
▲ 血小板細胞
02 自然干燥法
適用范圍
本身就較干燥的樣品,如某些昆蟲、植物種子、毛發、牙齒等。
基本制備流程
取材-自然干燥-粘樣噴金
▲ 硅藻,圖像添加偽彩
03 冷凍掃描電鏡制樣
適用范圍
對內部含水多而表面含水少的樣品進行快速制備成像。
*冷凍掃描電鏡法制樣簡便速度快,樣品更接近自然生理狀態,并且可以使用冷凍斷裂的方式對樣品內部結構進行觀察。
基本制備流程
取材-液氮冷凍-冷凍轉移-升華-噴金
▲ 植物葉片氣孔
對樣品內部超微結構進行觀察時
01 常規超薄切片制樣
適用范圍
當需要對單張超薄切片進行超微結構成像時最常用的制樣方法。
單張超薄切片可以使用透射電鏡、掃描電鏡的背散射電子探測器或掃描透射電子探測器進行觀察,在亞細胞結構成像的水平上,成像效果相差不大。
基本制備流程
取材-染色固定-脫水-滲透包埋-切片-后染色
▲ 小鼠腦組織,使用STEM掃描透射電子探測器拍攝
02 體電鏡制樣
適用范圍
當需要對一定體積的組織進行逐層成像時使用的制樣方法。
*近些年來隨著掃描電鏡技術的不斷發展,三維電鏡成像變得越來越簡便化、自動化,也受到人們越來越多的關注。體電鏡樣品制備可以提高樣品塊的襯度和導電性,更加適合直接對樣品塊進行成像的體電鏡應用。
基本制備流程
取材-固定-雙鋨染色-脫水-滲透包埋-修塊成像